将养


将养

将养详情:

《本人细胞培养实际操作记录》

作者:

细胞复苏

1、将细胞系从液氮中取出,放入4度冰箱中半个小时,然后放入恒温水浴锅中加热5分钟。

2、将培养基和血清从4度冰箱中取出,放入恒温水浴锅中加热(设定为37度)3分钟。

3、进入细胞培养间,在无菌操作台上配制血清培养基。(使用无菌操作台时,需将无菌操作台用75%酒精擦拭,之后用紫外灭菌30分钟以上。)

4、将细胞系离心,然后进入无菌操作台进行后续处理,将离心过的细胞系的上清液直接倒掉。

5、将培养液加入管中用移液枪吹打,将细胞吹打散开,从而使细胞尽量均匀的分散在培养液中。

6、将吹打好的细胞及培养液用移液枪转移到培养瓶中,加入培养液5ml,放入CO2培养箱中。(放入之前将培养瓶的瓶口拧紧,放入之后可拧松。)

培养基的配制

1、将1640培养基与血清从4度冰箱中取出放入恒温水浴锅中(37度)。

2、将血清和培养基与细胞一起拿到细胞培养间,经酒精消毒后方可放入无菌操作台上

3、用5ml移液管取9次1640培养基加入到一个培养瓶中,然后换用新的5ml移液管取1次血清加入该培养基中,摇匀。

更换培养基:更换培养基的时候,移液管不能接触到瓶口已经瓶壁,防止细胞污染(即使培养基洒出来也可);将培养瓶放入培养箱中以及将培养瓶放入无菌操作台的时候需用酒精消毒,将培养瓶从培养箱中拿出来放入培养箱之前酒精消毒后需将酒精风干。

更换培养基

1、将细胞从CO2培养箱中取出,在放入无菌操作台之前用酒精消毒。(之前将瓶盖拧紧。)

2、待酒精风干后放入无菌操作台,然后倒掉上清液,更换培养基。(更换培养基的时候,需要保持瓶口的干燥,可用酒精灯烧下瓶口,但是不能烧太久。)

3、加入培养基后,将瓶盖拧紧,然后放入培养箱中,拧松瓶盖。

细胞分瓶(传代培养)

1、将细胞从培养箱中取出,拧紧瓶口,在放入无菌操作台前,用酒精消毒。

2、倒掉上清液,用PBS缓冲液清洗2-3次,每次用液5-10ml。

3、取05ml胰蛋白酶加入培养瓶中,轻微晃动,使胰蛋白酶能侵润到长有细胞的瓶壁,消化1分钟(也可直接倒掉)。

4、加入10ml配好的培养基,用移液枪吹打细胞,将贴在瓶壁的细胞尽量吹打下来。

5、用新的移液管将细胞平均分装到2个培养瓶中。

6、拧紧瓶盖,酒精消毒后放入培养箱中,松下瓶盖。

细胞冻存

《组培具体操作》

作者:

植物组织培养具体操作

二、植物组织培养过程(以菊花叶片为外植体)

1、培养基的配制:

MS培养基母液的配制:MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按照比例配制成MS培养基干粉,用时直接取用即可。每42gMS培养基加1L蒸馏水。

MS培养基的配制:取1000mL烧杯,称取42gMS培养基干粉于不锈钢盆中,加水至800ml。使用电磁炉加热使琼脂溶解,按照要求加入浓度为05mg/ml的激素NAA02ml,定容至1000ml,用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节pH至60。

将配好的培养基迅速分装至150ml组培瓶中,拧上盖子,整齐的放入到高压蒸汽灭菌锅的物料篮内,121℃下灭菌20min。

将培养皿用报纸包好,一起放入灭菌锅进行灭菌。

高压蒸汽灭菌锅的使用注意事项:

1、排气管通入到盛水的桶中,避免蒸汽将人烫伤。

2、放入灭菌物品后,拧紧阀门,打开开关进行灭菌。

3、在压力表归零之前切勿试图开盖。

2、接种仪器及器具

仪器:超净工作台光照培养箱接种器具杀菌器

器具:枪形镊剪刀器具架酒精灯培养皿酒精棉球

3、外植体类型

实验室做植物组织培养实验时采用的是无菌苗,一般以菊花作为培养对象,其中分为芽培和叶培。

芽培:将无菌苗的带有芽的嫩枝条插入生根培养基,经过培养后直接生长并生根,形成一个大的完整的植株。达到了扩大繁殖培养的目的。

叶培:使用的是诱导培养基,先将叶片剪碎后接种到培养基上,叶片组织经过脱分化会形成愈伤组织,然后经过再分化形成不定芽,转接到生根培养基上之后继续培养,可生长成为一个完整的植株。

此外还可以用植物其他的离体器官、组织以及细胞等作为外植体,但就我们实验室的条件暂时使用叶和芽作为外植体进行培养。除无菌的菊花苗外,还可以使用烟草、矮牵牛、小丽花以及百合等无菌苗进行扩大繁殖培养。它们的培养基添加激素的浓度不一样,其他都相同。

菊花无菌苗示意图

用带一个叶和一个芽的嫩枝为外植体,将形

态学的下端插入培养基。

4、菊花的接种与培养

1)植物组织培养实验室内打开紫外线杀菌照射装置半小时后关闭,打开风机通风半小时。

2)超净工作台内同时进行紫外线照射和通风步骤。并将枪形镊和剪刀放到接种器具杀菌器上。

3)将组培苗、培养基以及培养皿准备到超净工作台上,将工作台玻璃门半关,双手伸入。

4)将灭菌完毕后的镊子和剪刀放到架子上,注意不要放到工作台上。

5)点燃酒精灯,用酒精棉球擦拭双手以及工作台。并用酒精棉球擦拭剪刀和枪形镊。

6)镊子和剪刀在使用前和使用之后都要在火焰上进行灼烧,待冷却后再接触无菌苗。

7)将培养皿在火焰旁转圈后打开,放到酒精灯附近的工作台操作区域。

8)将组培瓶瓶盖在火焰旁迅速灼烧后打开盖,将盖子朝上放置,此步骤不要在培养皿上方进行。

避免污染培养皿。

9)左手持镊子,右手拿剪刀,将组培苗按照要求剪碎到培养皿中。然后盖上培养皿盖子。

10)将用完的组培瓶瓶口和盖子都在火焰旁迅速灼烧后盖上。

11)掉到试验台上的组培苗应该抛弃,不能再用。

12)培养基瓶盖打开和盖住之前都要在火焰旁迅速灼烧,右手持枪形镊夹取外植体,注意将形态学

的下端轻轻插入培养基,不要将芽的部分插入培养基。接种完毕后灼烧后盖盖。

13)整理工作台,将自己接种的组培苗贴上标签,标注自己的姓名、外植体名称以及接种日期,然

后放到光照培养箱内进行培养。每天光照15小时,暗培养9小时,23℃下恒温培养。

《养细胞步骤》

作者:

一、细胞换液

1、实验室和超净台紫外线消毒30min

2、开始实验,关闭紫外线,玻璃板不能超过标记的黄线,打开通风设备

3、用酒精棉由里向外消毒实验台,再用酒精棉消毒双手,放入超净台的试剂瓶应先用

酒精棉擦拭在放入超净台中

4、将细胞培养瓶瓶口过火,然后打开再将瓶口和瓶盖过火,如果培养瓶数量过多应将

瓶盖与培养瓶对应以免盖错造成互相感染

5、倒掉培养瓶中的培养液,瓶口应尽量远离废液缸,以免造成污染

6、用移液枪吸取5mlPBS,取枪头需用镊子夹取,镊子用之前过火,只夹取枪头尾部,

然后用手拿出,注意手只能碰枪头尾部的头部,枪头不能接触超净台,用移液枪吸

取PBS时应该将枪头的头部过火,移液枪的枪头不能碰到试剂瓶,进行操作时注意

胳膊不应放到培养瓶上方

7、将PBS注入到培养瓶中,应将移液枪中的液体打到没有细胞的那一面

8、将培养瓶放倒轻轻晃动,洗去培养瓶细胞面的死细胞以及细胞的代谢产物,倒掉PBS

9、换取另一个新的枪头,吸取培养液打入到培养瓶中,将培养瓶与瓶盖过火,盖好,

如果多个培养瓶枪头不碰到瓶壁,则不用更换枪头,否则需要更换枪头

10、放入培养箱中,瓶盖应该拧松,与外界空气想通

注意事项:1、进入超净台的试剂瓶应消毒

2、使用的器械应该进行过火

3、试剂瓶应该过火之后打开,盖上之前也应该过火

4、注意胳膊不能放到培养瓶口的上方

5、倒废液时瓶口远离废液缸

6、拿出的培养瓶应该拧紧,放入培养箱的培养瓶应将瓶盖拧松使之与外界

空气想通

7、所用试剂在使用前应该预热

二、细胞传代

1、将培养瓶拿到超净台中,倒掉培养液

2、加入PBS冲洗坏死的细胞以及细胞代谢产物

3、加入胰酶溶解细胞,加入胰酶后放入培养箱中,一段时间后可用显微镜看到细胞变

圆,从培养瓶上脱落下来,形成一层白膜

4、加入培养液反复吹打,使细胞从培养瓶上脱落,吹打应该尽量减少泡沫的产生,以

免导致细胞的机械性损伤

5、将培养瓶中的液体移到试管中,进行离心

6、离心后出现细胞沉淀,弃掉上层液体,重新加入培养液,然后反复吹打使细胞混匀

7、将混匀的细胞加到培养瓶中,在将细胞以及培养液导入的培养瓶时,移液枪应朝向

细胞不生长的那一面将细胞与培养液导入到培养瓶中

《北京市社保新政策》

作者:

8月30日,北京市政府常务会审议通过《北京市“十三五”时期老龄事业发展规划》(以下简称规划)。从养老钱袋子、居家养老、机构养老、新型养老模式等方面,展现了北京养老事业的新蓝图。

到2020年,本市每千名户籍老年人养老机构床位数将动态保持在40张,老人居家养老将由政府购买服务提供帮扶,全市将建设1000个社区养老驿站,本市疏解腾退的厂房、校舍、培训中心等设施都将优先用于养老。

基础养老金将适度提高

根据规划目标,到2020年,本市五项社会保险基金收缴率保持98%及以上,城乡基本社会保险实现应保尽保;老年人养老和医疗保障待遇逐年提高。同时,职工养老保险个人账户制度也将得到完善,鼓励多缴多得。

物价涨,养老金涨不涨?规划明确,根据社会经济发展水平和物价增长情况,机关事业单位和企业离退休人员基本养老金也将合理调整,适度提高城乡居民基础养老金和福利养老金水平。

同时,将落实国家渐进式延迟退休年龄政策,探索建立计划生育家庭的养老保障制度,大力发展职业年金、企业年金、商业养老保险。完善基本医疗保险和城乡居民大病保险制度,推进建立统一的城乡居民医疗保险制度。

本市还将完善高龄津贴、高龄特困老年人补贴、居家养老服务补贴、老年人意外伤害保险等制度。优先考虑失能、高龄、贫困、独居等困难老年群体特殊需要,逐步发展面向所有老年人的普惠性优待项目。

目前,本市65岁以上老人正在将老年人优待卡换成养老助残卡,明年60岁以上老人也将全部换卡,以后就要实现“今天退休,明天领卡”。今后,这张卡将增强社会福利、优待服务、消费优惠、记录消费痕迹等功能,智能分析老年人个性化养老需求,成为老年人专属“金卡”。

《2019精品教育《微生物的实验室培养》的教学设计》

作者:

《微生物的实验室培养》的教学设计

一、教学目标

1、知识目标:了解有关培养基的基础知识

2、能力目标:掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术

3、情感目标:养成勇于实践、严谨求实的科学态度

二、教学重点、难点

无菌操作技术

三、教学过程

1、配制微生物培养基

向学生提供几种微生物培养基的配方,让学生通过比较分析各种配养基配方,明确微生物培养基的基本成分包括:碳源、氮源、无机盐和水,有些微生物还需要某些特殊的生长因子。

计算:根据配方比例,计算100mL牛肉膏蛋白胨固体培养基各成分用量。

称量:准确称取各成分。

溶化:加水加热熔化牛肉膏;加入蛋白胨和氯化钠继续加热;加入琼脂;用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌(防止琼脂糊底而导致烧杯破裂)

调pH:用1mol/LNaOH溶液调节pH至偏碱性。

灭菌:将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌;所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。

倒平板:待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞;右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰;左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。

2、无菌接种

通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。在酒精灯火焰旁冷却接种环,并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到消灭试管口杂菌的目的。将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙,把接种环伸入平板内划3~5条平行线,盖上皿盖(不要划破培养基)。灼烧接种环,冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程,完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。将平板倒置放在培养箱中培养。

还可以用涂布法接种:将菌液进行一系列梯度稀释,并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的标准菌落。

3、培养观察

将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃的恒温箱中,培养,在12小时和24小时后,分别观察和记录结果。可安排生物课代表或小组长进行定期观察,并做好计录,以便及时让其他学生观察到自己的实验成果。

《北京社保有哪些新政策》

作者:

一、北京社保新政策

按照2011年7月开始实施的社会保险法规定,参加职工基本养老保险的个人达到法定退休年龄后,累计缴费不足15年,可申请转入户籍所在地新型农村社会养老保险或城镇居民社会养老保险,享受相应的养老保险待遇;或者将剩余年限补缴齐,同样享受按月领取养老金。

不过,如果参保人员自愿选择一次性领取个人账户储存额时,其职工基本养老保险关系即终止,不再享受按月领取职工基本养老保险待遇,也不得再申请转入户籍所在地新型农村社会养老保险或者城镇居民社会养老保险和享受相应的养老保险待遇。届时,社保经办机构将终止其职工基本养老保险关系,并将个人账户储存额一次性支付给本人。该办法不限户籍是否在本市,只要在京参保缴费即可。

对于具体手续,参保人需在北京市社会保险网上服务平台下载专区的表格下载栏目中,下载《养老保险个人账户储存额一次性领取申请单》,填写后交给用人单位,由用人单位到当地社保经(代)办机构,为相关个人办理职工基本养老保险关系终止手续。

二、北京社保未来规划

北京市政府常务会审议通过《北京市“十三五”时期老龄事业发展规划》(以下简称规划)。从养老钱袋子、居家养老、机构养老、新型养老模式等方面,展现了北京养老事业的新蓝图。

到2020年,本市每千名户籍老年人养老机构床位数将动态保持在40张,老人居家养老将由政府购买服务提供帮扶,全市将建设1000个社区养老驿站,本市疏解腾退的厂房、校舍、培训中心等设施都将优先用于养老。

基础养老金将适度提高。根据规划目标,到2020年,本市五项社会保险基金收缴率保持98%及以上,城乡基本社会保险实现应保尽保;老年人养老和医疗保障待遇逐年提高。同时,职工养老保险个人账户制度也将得到完善,鼓励多缴多得。

物价涨,养老金涨不涨?规划明确,根据社会经济发展水平和物价增长情况,机关事业单位和企业离退休人员基本养老金也将合理调整,适度提高城乡居民基础养老金和福利养老金水平。

同时,将落实国家渐进式延迟退休年龄政策,探索建立计划生育家庭的养老保障制度,大力发展职业年金、企业年金、商业养老保险。完善基本医疗保险和城乡居民大病保险制度,推进建立统一的城乡居民医疗保险制度。

北京社保的新政策主要是各人参保且缴费年限不满十五年时,可以一次性提取所有的社保缴纳费,或者也可以选择转入户籍所在地的农村或者城镇的养老保险。北京社保未来也有着科学的规划和理想蓝图。一些新型的养老方式将会成为现实,养老保险也讲越来越完善。

《2015广州养老保险新规解读》

作者:

2012年8月广州市出台了《城乡居民社会养老保险办法》,规定对领取原城镇老年居民养老金的参保人,有两个选择,

一是按照原城镇老年居民养老保险办法继续缴费并领取470元/月养老金,

另一个选择是可以转按城乡居保办法的标准一次性缴费15年并享受城乡居保养老金,但需在2015年12月前办理,逾期不再办理。

相关新闻

广州新规:养老保险欠费6个月将销户

继去年正式实施《广州市城乡居民基本养老保险实施办法》之后,近日,广州市人力资源和社会保障局正式印发实施《广州市城乡居民基本养老保险参保登记和待遇申领办法》(以下简称《办法》),对参保人的参保登记和待遇申领作出相关规定,其中提出将在每年的4~6月办理领取养老金资格确认手续,而对于超过6个月(含6个月)的欠费,将被销户处理。

今年12月前仍可选择趸缴养老保险费

根据《办法》,城乡居民基本养老保险费将采取“当月核定,次月征收”的模式,委托部分金融机构代收。金融机构将于征收当月进行滚动批量划扣,集体经济组织或参保人应确保银行账户资金充裕。如集体经济组织或参保人银行账户资金不足,超过当月月底仍未成功扣缴当月应缴养老保险费的,将作为欠缴养老保险费处理;对超过6个月(含6个月)的欠费,将视为应缴未缴养老保险费,由社会保险经办机构作核销处理。

根据《办法》,参保人也可在今年12月前,选择按本办法规定趸缴不超过15年的养老保险费后计发养老金,原城镇老年居民养老保险个人账户余额退回给参保人。参保人选择按本办法参保后,将不得再次变更。而选择按年/季度缴费的参保人,应在办理参保的次月将本年/季度的社保费存入银行账户,同时选择自动续期的参保人应在每年1月/每季度第1个月将每年/每季度养老保险费存入银行账户。

每年4~6月办理领取养老金资格确认手续

而对于待遇的发放问题,《办法》提出,城乡居民基本养老保险养老金将通过金融机构实行社会化发放,社会保险经办机构在每月18日前将当月的养老金发至参保人银行账户。按月领取养老金的人员应按省、市的相关规定,在每年的4~6月办理领取养老金资格确认手续。集体经济组织或参保人本人应提供资格确认所需的相关材料,到所属的社会保险经办机构办理资格确认手续。对于未按规定办理领取养老金资格确认手续的人员,社会保险经办机构将从当年的7月起暂停发放其养老金;补办确认手续后,社会保险经办机构从补办的次月起正常发放养老金,原暂停发放的养老金一并补发。

●对超过6个月(含6个月)的欠费,将视为应缴未缴养老保险费,由社会保险经办机构作核销处理。

●参保人可在今年12月前,选择按本办法规定趸缴不超过15年的养老保险费后计发养老金,原城镇老年居民养老保险个人账户余额退回给参保人。

●按月领取养老金的人员应按省、市的相关规定,在每年的4~6月办理领取养老金资格确认手续。

《生物膜实验方法》

作者:

生物膜抑制:

(1)挑取新活化的Candida单菌落接种到新鲜RPMI-1640培养基中,培养至对数生长期。将菌液稀释到OD=01。然后接种到含有载玻片的6孔板中,每孔2ml。

(2)在37℃的湿度培养箱中培养3h,弃除上清,用1mlPBS轻轻洗两次。(3)用RPMI-1640培养基将2mg/ml的药物稀释到特定的浓度(一般在MIC浓度之下)。

(4)将稀释好的药物加入到上述含载玻片的6孔板中。37℃,湿度静置培养36h。

(对照组加入两性霉素B。)

(5)弃上清液,用1mlPBS洗涤2次,每孔加入1000μl新鲜培养基和500XTT到6孔板内,37℃,培养1-4h。

(6)吸出100ul上清液加到96孔板中,在490nm下测吸光值,空白对照组只加XTT。(XTT法)阳性对照:(amphotericinB)要做浓度梯度。

破坏已经形成的生物膜:

(1)挑取新活化的Candida单菌落接种到新鲜RPMI-1640培养基中,培养至对数生长期。将菌液稀释到OD=01。然后接种到含有载玻片的6孔板中,每孔2ml。

(2)在37℃的湿度培养箱中培养3h,弃除上清,用1mlPBS轻轻洗两次。(3)向上述6孔板中加入2ml新鲜培养基继续培养72h。

(4)用RPMI-1640培养基将2mg/ml的药物稀释到10,25,50,75,100ug/ml(一般大于MIC值)。

(5)去除原6孔板的培养基,将稀释好药物的培养基加入到上述6孔板中,每孔℃,湿度静置培养36h。(对照组加入两性霉素B。)阳性对照:(amphotericinB)要做浓度梯度。

(6)弃上清液,用1mlPBS洗涤2次,每孔加入1000μl新鲜培养基和500XTT到6孔板内,37℃,培养1-4h。

(7)吸出100ul上清液加到96孔板中,在490nm下测吸光值,空白对照组只加XTT。(XTT法)阳性对照:(amphotericinB)要做浓度梯度。

荧光染色检测cathelicidin破坏已经形成的生物膜:

(1)挑取新活化的Candida单菌落接种到新鲜RPMI-1640培养基中,培养至对数生长期。将菌液稀释到OD=01。然后接种到含有载玻片的6孔板中,每孔2ml。

(2)在37℃的湿度培养箱中培养3h,弃除上清,用1mlPBS轻轻洗两次。(3)向上述6孔板中加入2ml新鲜培养基继续培养72h。

(4)用RPMI-1640培养基将2mg/ml的药物稀释到10,25,50,75,100ug/ml(一般大于MIC值)。

(5)去除原6孔板的培养基,将稀释好药物的培养基加入到上述6孔板中,每孔℃,湿度静置培养36h。(对照组加入两性霉素B。)阳性对照:(amphotericinB)要做浓度梯度。

(6)去除培养基,加入1000ul含有1ulSYBRGreenI和1ulPI染料的RPMI-1640培养基避光30℃培养20min。荧光显微镜检测。

《发酵工艺学实验》

作者:

发酵工艺学实验

第一个大实验青霉素的发酵(16学时)

该实验分成四个小实验,共16学时

发酵工艺流程

丝状菌三级发酵工艺流程如下图所示:

砂土管→斜面母瓶(孢子培养)→大米孢子(孢子培养)→种子罐25℃,6~7天25℃,6~7天

(种子培养)→繁殖罐(种子培养)→发酵罐

25℃,40~45h,1:2(v/v/min)25℃,13~15h,1:15(v/v/min)

(发酵)→放罐(冷至15℃)→至提煤炼部门

22~26℃,1:(1~08)(v/v/min)

实验一种子制备

实验目的:

1掌握种子培养基的制备

2掌握发酵种子制备技术

实验步骤:

1种子培养基配制

培养基的组成(%):玉米浆38,蔗糖2,硫酸铵02,碳酸钙01,硫酸亚铁002,pH47~49。

2培养基的分装及其灭菌

将配好的培养基分装到250ml摇瓶中,每瓶60ml,最后将培养基置于121℃灭菌20min。

3接种

将已经活化的斜面种子接种到摇瓶中25℃摇床培养。

4培养时间及镜检

一般种子培养需要2天左右,然后利用镜检来检测培养过程是否染菌。

实验二发酵过程控制

实验目的:

1掌握发酵培养基的制备

2掌握发酵种子发酵过程控制

实验步骤:

1发酵培养基配制

培养基的组成(%):玉米浆4,蔗糖1,磷酸二氢钾05,无水硫酸钠05,碳酸钙007,硫酸亚铁0018,硫酸锰00025,pH47~49。

2培养基的分装及其灭菌

将配好的培养基分装到2L摇瓶中,每瓶800ml,最后将培养基置于121℃灭菌20min。

3接种

将已经培养好的种子接种到摇瓶中25℃摇床中培养。

4观察和取样

观察发酵过程中是否存在异常情况,如发酵液颜色、气味是否异常等情况。每10h取样一次,每次10ml左右。

5培养时间及镜检

一般种子培养需要4天左右,然后利用镜检来检测培养进程是否染菌。

实验三发酵过程中生理生化指标的检测

实验目的:

掌握发酵进程中各种生理生化指标的检测

实验步骤:

1利用称重法测定生长曲线

将每批次的样品(5~10ml)离心后称重,测得不同时间菌体的质量,以时间为横坐标,质量为纵坐标,得到曲线。

2测糖(具体步骤见生化试验)

利用DNS法,测定每批次的样品(5~10ml)离心后的发酵液的还原糖的含量,以时间为横坐标,含量为纵坐标,得到曲线。

3效价测定(见实验四)

实验四青霉素效价测定(利用抑菌圈的实验方法测定青霉素效价)

1培养基配制LB培养基

2指示菌的培养

选取指示菌金色葡萄球菌、枯草杆菌接种到灭过菌的液体培养基中,在30℃左右培养24~36h。

3抑菌试验步骤

a取02培养好的指示菌于平皿中,每种菌做2~3个平行样。

b用涂棒将指示菌在平皿中涂布均匀。

c用打孔器在涂布均匀的平皿中央打孔。

d取01ml不同时间取样的发酵液于孔中。

e最后将平皿放置于30℃左右培养箱中培养并观察。

第二个大实验淀粉酶的发酵(16学时)

该实验分成四个小实验,共16学时

主要实验内容

1产淀粉酶菌种发酵种子制备

2产淀粉酶发酵过程控制

3产淀粉酶生长曲线测定

4产淀粉酶活性检测

实验一种子制备

实验目的:

1掌握种子培养基的制备

2掌握发酵种子制备技术

实验步骤:

1种子培养基配制

LB培养基:牛肉膏1%,蛋白胨05%,NaCl05%,pH70左右。

2培养基的分装及其灭菌

将配好的培养基分装到250ml摇瓶中,每瓶100ml,最后将培养基置于121℃灭菌20min。3接种

将已经活化的斜面种子接种到摇瓶中30℃摇床中培养。

4培养时间及镜检

一般种子培养需要2天左右,然后利用镜检来检测培养过程是否染菌。

实验二发酵过程控制

实验目的:

1掌握发酵培养基的制备

2掌握发酵种子发酵过程控制

实验步骤:

1发酵培养基配制

LB培养基:牛肉膏1%,蛋白胨05%,NaCl05%,pH70左右。

2培养基的分装及其灭菌

将配好的培养基分装到1L摇瓶中,每瓶400ml,最后将培养基置于121℃灭菌20min。

3接种

将已经培养好的种子接种到摇瓶中30℃摇床培养。

4观察和取样

观察发酵过程中是否存在异常情况,如发酵液颜色、气味是否异常等情况。每10h取样一次,每次10ml左右。

5培养时间及镜检

一般种子培养需要1天左右,然后利用镜检来检测培养过程是否染菌。

实验三发酵过程中生理生化指标的检测

实验目的:

掌握发酵过程中各种生理生化指标的检测(主要是生长曲线测定)

实验步骤:

1pH变化曲线测定

2利用称重法测定生长曲线

将每批次的样品(5~10ml)离心后称重,测得不同时间菌体的质量,以时间为横坐标,质量为纵坐标,得到曲线。

3用比色法测定生长曲线

将每批次的样品(5~10ml)在OD600的条件下比色,以培养时间为横坐标,OD值为纵坐标,得到曲线。

实验四淀粉酶效价测定

1培养基配制淀粉培养基

2%淀粉,2%琼脂

2水解淀粉圈实验

用打孔器在平皿中央打孔,取01ml不同时间取样的发酵液于孔中,最后将平皿放置于30℃左右培养箱中培养并观察。

《广州城乡居民基本养老保险欠费半年以上将销户》

作者:

城乡居民基本养老保险欠费半年以上将销户

广州市人力资源和社会保障局正式印发实施《广州市城乡居民基本养老保险参保登记和待遇申领办法》,根据《办法》,城乡居民基本养老保险费将采取“当月核定,次月征收”的模式,委托部分金融机构代收。金融机构将于征收当月进行滚动批量划扣,集体经济组织或参保人应确保银行账户资金充裕。如集体经济组织或参保人银行账户资金不足,超过当月月底仍未成功扣缴当月应缴养老保险费的,将作为欠缴养老保险费处理;对超过6个月(含6个月)的欠费,将视为应缴未缴养老保险费,由社会保险经办机构作核销处理。

参保人可趸缴养老保险费

根据《办法》,参保人也可在今年12月前,选择按本办法规定趸缴不超过15年的养老保险费后计发养老金,原城镇老年居民养老保险个人账户余额退回给参保人。参保人选择按本办法参保后,将不得再次变更。而选择按年/季度缴费的参保人,应在办理参保的次月将本年/季度的社保费存入银行账户,同时选择自动续期的参保人应在每年1月/每季度第1个月将每年/每季度养老保险费存入银行账户。

办理领取养老金时间:

而对于待遇的发放问题,《办法》提出,城乡居民基本养老保险养老金将通过金融机构实行社会化发放,社会保险经办机构在每月18日前将当月的养老金发至参保人银行账户。按月领取养老金的人员应按省、市的相关规定,在每年的4~6月办理领取养老金资格确认手续。集体经济组织或参保人本人应提供资格确认所需的相关材料,到所属的社会保险经办机构办理资格确认手续。对于未按规定办理领取养老金资格确认手续的人员,社会保险经办机构将从当年的7月起暂停发放其养老金;补办确认手续后,社会保险经办机构从补办的次月起正常发放养老金,原暂停发放的养老金一并补发。